衣壳组装调节剂（CpAM）代表了一类新的乙肝抗病毒药物，上海恒瑞医药科学家发现了一种化合物名为SHR5133，它是一种高效的新型HBV衣壳组装调节剂，并将化合物合成和临床前开发结论发表在ACS Medicinal Chemistry Letters。

乙肝药化前沿，上海恒瑞医药科学家发现，新型高效化合物SHR5133

药物发现过程十分重要，一种新化合物从发现到动物实验也要过许多关。在体外抗HBV活性试验中，HepG2.2.15是一种稳定表达的乙肝病毒人肝母细胞瘤。病毒含有HBVDNA的颗粒可以在细胞内通过复制、转录和包裹化产生，然后分泌出来。

本研究的化合物被认为通过阻止HBV衣壳蛋白的组装来抑制HBV复制。研究人员通过定量PCR对HepG2.2.15细胞释放的HBVDNA进行定量分析，确定了化合物的抗HBV活性。HBVDNA定量是通过QIAamp 96 DNA QIAcube HT Kit (Qiagen) 和 Qiagen提取HBVDNA根据制造商的说明进行自动DNA提取装置。

来自ACS Medicinal Chemistry Letters

对HepG2细胞的细胞毒性作用方面，研究人员将细胞以6,000?个细胞/孔接种到 96 孔板上，并在 37°C、5% CO2 下孵育 16-20 小时。第 2 天，化合物在 DMSO 中溶解至 20mM，并在 DMSO 中进行 3 倍 8 点系列稀释，起始浓度为 2mM。然后将化合物的系列稀释液在细胞培养基中稀释 200 倍，最终 DMSO 为 0.5%。吸出培养基并将200μl具有系列稀释化合物的培养基添加到每个孔中。

用 0.5% DMSO?处理的细胞用作阴性对照。将板在 37°C、5% CO2 下孵育 72 小时。第 5 天，根据制造商的说明通过向每个孔中添加 CellTiter Glo 来检测细胞活力，并在酶标仪（PerkinElmer）中检测发光信号。 CC50定义为细胞毒作用达到50%时的浓度，采用四参数Logistic非线性回归拟合计算。

AAV-HBV感染小鼠模型的体内功效试验方面，体内药效试验在徕博科医药研发(北京)有限公司上海分公司进行。所有本研究中的程序符合当地动物福利立法、Covance 全球政策和程序以及《实验动物护理和使用指南》。

4-5周龄的雄性 C57BL/6 小鼠在到达后在动物设施中适应 10 天。在第-28天，所有动物通过尾静脉（IV）注射1×1011 AAV-HBV载体基因组（在200μL PBS中）以建立模型。每天监测动物临床体征并在第-38、-28和-7天测量体重。在第-7 天（AAV-HBV 注射后 21 天），在麻醉下通过眶后窦收集血样用于基线病毒载量分析。

第-1天（第一次给药前一天），根据第-7天的血清HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平以及体重，将HBV感染小鼠随机分为6组，每组6只动物，用于化合物治疗。 NVR-3778 400 mg/kg（第 02 组）、SHR5133 3 ~ 30 mg/kg（第 03 ~ 05 组）和 JNJ-379 10 mg/kg（第 06 组）通过口服管饲法以?20 mL/kg 每天两次给药。第0～28天。每天监测动物临床症状。每周两次测量体重以计算剂量。在第 0、3、7、10、14、17、21、24 和 28 天（每只小鼠 15 μL）给药之前，在给药前每周两次从所有小鼠收集血样用于血清制备。第28天，对小鼠实施安乐死，收集血清和肝组织并冷冻。

如上所述通过HBV DNA定量PCR测定血清病毒载量。将血清用无菌生理盐水稀释 500 倍，并根据制造商的说明使用 HBeAG ELISA KIT 或 HBsAG ELISA KIT (Autobio) 进行 HBeAG 或 HBsAG 测量。

小番健康结语：在本研究中，上海恒瑞医药科学家通过药效团探索发现了一种以稠合杂环酰胺为特征的新型化学型。铅优化导致化合物 8 的 EC50 值为 511 nM，然后发现哌嗪上的甲基取代显着提高了体外效力。进一步的SAR研究确定了关键化合物 SHR5133，它显示出体外高抗病毒效力、良好的跨物种药代动力学特征和体内强大功效。

在ACS Medicinal Chemistry Letters上，恒瑞医药科研人员表示，衣壳组装调节剂通过靶向乙肝病毒（HBV）的核心蛋白以破坏组装过程。本研究发现了一种新型高效的衣壳组装调节剂，即SHR5133！有关SHR5133的药物合成过程，在此已省略，仅科普药物发现的临床前试验方法和结论，业内人士也将衣壳组装调节剂称为核心蛋白变构调节剂。